sábado, 29 de agosto de 2020

Técnicas de Edición de Acidos Nucléicos en demencia vascular tipo CADASIL

 Tema: La omisión natural del exón NOTCH3 atenúa la agregación de la proteína NOTCH3 y la gravedad de la enfermedad en pacientes con CADASIL

Exclusión dirigida del exón NOTCH3 utilizando ASO y CRISPR / Cas9 in vitro. (A) Análisis de RT-PCR de CMLV después de la transfección con un exón 9 dirigido a ASO, que muestra una banda a ~ 300 pb, correspondiente al tamaño del fragmento esperado después de la omisión del exón 9, que se confirmó como una omisión correcta del exón 9 con secuenciación de Sanger . (B) Se utilizaron ARN guía dirigidos a los intrones NOTCH3 8 y 9 para eliminar el exón 9 del ADN genómico de las células HEK293. El análisis de RT-PCR confirmó la exclusión del exón 9 a nivel de ARN. (C) Los ARN guía dirigidos al intrón 3 y el intrón 5 se utilizaron para eliminar el exón 4 y el exón 5 del ADN genómico del control (carril izquierdo) y las CMLV derivadas del paciente de CADASIL (carril derecho), lo que se confirmó con la secuenciación de Sanger. FL, longitud completa; −RT, condición sin transcriptasa inversa; Δex9, producto de PCR que carece del exón 9; Δex4–5, producto de PCR que carece del exón 4-5; punta de flecha,

Tipo de Edición: Ex vivo

Dirigidas hacia: cisteína NOTCH3 exón 9 ~ 300 pb

Dirigidas por: a nivel de ARN usando ASO y a nivel de ADN usando la edición de genes mediada por CRISPR / Cas9.

Uso de Vectores: pSQT1313

Órgano/célula a tratar: vasos sanguíneos del cerebro

Vía de administración: inyección intratecal

Resultados a corto, mediano y largo plazo: proporcircionar evidencia en humanos de que la omisión del exón NOTCH3 correctora de cisteína se asocia con una agregación de ECD de NOTCH3 vascular mínima y un fenotipo de aparición tardía relativamente leve. Estos hallazgos respaldan los esfuerzos continuos en el desarrollo de la corrección de cisteína NOTCH3 para el tratamiento de pacientes con CADASIL.
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