Técnica molecular epigenómica para Demencia Vascular tipo CADASIL

Análisis de metilación del ADN del promotor OCT4 en iPSCs WT y CADASIL. Los círculos abiertos y cerrados indican dinucleótidos CpG no metilados y metilados, respectivamente

Secuenciación de bisulfito del promotor OCT4

El ADN genómico se extrajo con el kit Qiagen Blood and Tissue. La modificación del ADN genómico con bisulfito se llevó a cabo utilizando el kit de modificación de ADN rápido CpGenome (Millipore) siguiendo las instrucciones del fabricante. El fragmento genómico modificado del promotor OCT4 se amplificó usando LA Taq Hot StartVersion (TAKARA) como se describió anteriormente  A continuación, los productos de la PCR se purificaron usando un kit de purificación de PCR (Qiagen) y posteriormente se clonaron en el vector pMD20 T (TAKARA). Se secuenciaron siete clones de cada muestra. Los cebadores usados para la PCR: me- OCT4 cebador directo, ATTTGTTTTTTGGGTAGTTAAAGGT, me- OCT4 cebador inverso, CCAACTATCTTCATCTTAATAACATCC.

link: https://link.springer.com/article/10.1007/s13238-019-0608-1